Akcja gry Mafia III  osadzona została w roku 1968, w fikcyjnym mieście New Bordeaux, wzorowanym na Nowym Orleanie, a głównym protagonistą jest niejaki Lincoln Clay – weteran wojny w Wietnamie, należący do niewielkiej organizacji przestępczej. Jego ugrupowanie zostało jednak zdradzone, a najbliższe mu osoby w brutalny sposób zlikwidowano, dlatego też motywem przewodnim trójki jest dokonanie zemsty na oprawcach swoich towarzyszy, a w szczególności na osobie Sala Marcano, który jest donem włoskiej rodziny odpowiedzialnej za masakrę. Niezwykle istotną nowością względem poprzednich odsłon serii jest wprowadzenie możliwości przejmowania nielegalnych interesów wrogich ugrupowań. Po osłabieniu pozycji lokalnego bossa mafijnego możemy zaatakować jego główną siedzibę i przejąć na własność. W grze nie zabrakło też możliwości korzystania z osłon oraz dynamicznej walki wręcz, w tym opcji brutalnego ogłuszania wrogów. Nie bez znaczenia dla rozgrywki jest również możliwość prowadzenia ostrzału podczas jazdy samochodem, której model również znacząco zmieniono – obecnie jest bardziej zręcznościowy niż w częściach poprzednich.